1965年入永隆影業(yè)公司，參加拍攝臺語片。1966年入國聯(lián)影業(yè)公司。1970年因在影片《苦情花》中扮演角色，獲第十六屆亞洲影展最佳女配角獎。1970年入中國電視公司，參加拍攝閩南語電視連續(xù)劇，期間也參加拍攝影片。

陳佩伶很小就出道，以演出臺語片為主，以電影「苦情花」獲得第十屆亞洲影展最佳女配角獎。17歲與導(dǎo)演陳俊良結(jié)婚，離婚後獨力扶養(yǎng)二女，後來中視開播，她演出閩南語連續(xù)劇「啞巴與新娘」、「一代女皇武則天」、「她的一生」等。

陳佩伶還是中視閩南語連續(xù)劇中的常青樹，其演技的精湛，內(nèi)心戲的表達收放自如，正是「一代女皇」制作單位找她演劇中嚴肅善妒的王皇后的主因?！兑淮省返闹攸c雖是武則天──潘迎紫，但是為了戲劇效果，編劇強化了王皇后──陳佩伶的份量，讓兩人在宮中對立，達到?jīng)_突的效果。

1988年7月31日晚間九時，陳佩伶包計程車去基隆作工地秀，車駛至南港至汐止間高速公路時，因故障靠至路肩檢修，卻被后方一